产品简介：

外泌体是一种含有RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），这些RNA和蛋白质由各种培养中的细胞分泌，在体液（包括血液、唾液、尿液和母乳）中大量存在。

外泌体被认为是细胞间信使，可在特定细胞之间传递效应物或信号大分子。然而，外泌体的结构、传递物组分以及所涉及的生物途径仍不完全清楚。外泌体功能与转运的生物学研究需要分离完整的外泌体，但目前外泌体分离困难，且方法繁琐、无特异性。

血清外泌体抽提试剂盒提供了一种从血清样本中浓缩完整外泌体的简单、可靠方法。通过束缚水分子，血清外泌体抽提试剂盒使不易溶解组分（即外泌体）从溶液中析出，可实现低速离心的方法收集。

外泌体保存条件：

-20℃保存，一年有效。4℃保存，长期有效。

注意事项：

（1）不建议使用血清外泌体抽提试剂盒从血浆中分离外泌体（血浆中含有高水平的凝血因子，会和外泌体共同沉淀，形成难以再悬浮的大颗粒，导致从血浆样品中提取的外泌体质量较差）；

（2）如果要从细胞培养基中分离完整的外泌体，请使用细胞上清外泌体抽提试剂盒；

（3）分离完整外泌体后，可使用外泌体RNA和蛋白质分离试剂盒纯化RNA和蛋白质；

（4）本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

使用方法：

 1. 细胞样品的准备：

a. 对于贴壁细胞：用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入含有血清的完全培养基终止消化，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清， 可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

b. 对于悬浮细胞：收集细胞到离心管内，1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2. 细胞固定：

加入1毫升冰浴预冷70%乙醇，轻轻吹打混匀，4℃固定30分钟或更长时间。通常固定2小时或以上更能保证染色效果，固定12-24小时可能效果更佳。1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3. 碘化丙啶染色液的配制：

参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：

注：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4oC保存，宜当日使用。

4. 染色：

每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀， 37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5. 流式检测和分析：

用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。