货号:B1030
规格:30
产品简介:
外泌体是一种含有RNA和蛋白质的小囊泡(30-120 nm),这些RNA和蛋白质由各种培养中的细胞分泌,在体液(包括血液、唾液、尿液和母乳)中大量存在。
外泌体被认为是细胞间信使,可在特定细胞之间传递效应物或信号大分子。然而,外泌体的结构、传递物组分以及所涉及的生物途径仍不完全清楚。外泌体功能与转运的生物学研究需要分离完整的外泌体,但目前外泌体分离困难,且方法繁琐、无特异性。
血清外泌体抽提试剂盒提供了一种从血清样本中浓缩完整外泌体的简单、可靠方法。通过束缚水分子,血清外泌体抽提试剂盒使不易溶解组分(即外泌体)从溶液中析出,可实现低速离心的方法收集。
外泌体保存条件:
4 oC保存,一周有效;-20 oC保存,长期有效。
注意事项:
(1)不建议使用血清外泌体抽提试剂盒从血浆中分离外泌体(血浆中含有高水平的凝血因子,会和外泌体共同沉淀,形成难以再悬浮的大颗粒,导致从血浆样品中提取的外泌体质量较差);
(2)如果要从细胞培养基中分离完整的外泌体,请使用细胞上清外泌体抽提试剂盒;
(3)分离完整外泌体后,可使用外泌体RNA和蛋白质分离试剂盒纯化RNA和蛋白质;
(4)本产品仅限于专业人员的科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
使用方法:
样本制备
(1)将血清样本取出,(如果样品冻结,在25°C水浴中解冻样品,直至呈液体状态),放置在冰上,用于下步操作;
(2)以12000g离心血清样本10分钟,去除细胞和碎片;
(3)将含有澄清的血清上清液转移到新管中,并将其放置在冰上,用于下步分离操作。
外泌体分离
(1)将所需体积的澄清血清转移到新试管中,添加0.2体积的血清外泌体抽提试剂;
血清体积 |
外泌体抽提试剂体积 |
100 uL |
20 uL |
1 mL |
200 uL |
(2)通过旋转或上下移管充分混合血清-试剂混合物,直到形成均质溶液;
注意:溶液应呈浑浊状。
(3)将样品在2-8 oC下静置30分钟;
(4)静置后,将样品在室温下以10000g离心10分钟;
(5)离心后,弃去上清液,外泌体即包含在管底部的颗粒中;
(6)使用移液管尖端将颗粒完全重悬于1×PBS或类似缓冲液中。
初始血清体积 |
重悬缓冲液体积 |
100 uL |
25-50 uL |
1 mL |
100-500 uL |
(7)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5ml离心管于4oC以12000g离心2min保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒(若沉淀较多,可12000g/2min离心多次,至无明显沉淀,每次取离心上清液。)颗粒被再悬浮后,外泌体可进行下游分析或通过亲和方法进一步纯化。
6. 保存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。