产品简介：

 NanoTrans ™ 转染试剂是佰欧晶最新研发的一种以纳米材料为基础的便捷高效细胞转染试剂，达到甚至超过了国际主流转染试剂的转染效果，适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以及用于基因治疗和mRNA疫苗载体。

保存条件：

     4 ℃保存，一年有效。

注意事项：

• 为了您的安全与健康，操作时请穿戴实验服、手套；

• 操作时请在生物安全柜或洁净工作台进行操作；

• 转染前必须保证细胞状态良好和传代次数；

• 制备NanoTrans-DNA复合物时，请不要使用含有血清的溶液；

• 阳性对照组设置：每次转染设置GFP对照组；

• 废弃物请丢入专门的生物废弃物处理袋；

• 如不小心接触到皮肤或眼睛请用大量清水冲洗；

• 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

使用方法：

细胞转染一般步骤：

步骤一：细胞接种。细胞在转染前18至24小时进行铺板，使单层细胞密度在转染时达到最佳（70-80%）。转染前30-60分钟，将含血清和抗生素的完全培养基新鲜更换至每个孔中。

注意：高血清含量（> 5%）的抗生素通常对转染效率没有抑制作用，建议使用含完整血清/抗生素的培养基作为起点；对于难转染细胞为取得最大效率和较低的细胞毒性，对高密度细胞（80%）进行转染。

步骤二：NanoTrans-DNA复合物的制备和转染。为确保NanoTrans-DNA复合物颗粒具有最佳尺寸，建议使用高葡萄糖无血清DMEM稀释DNA 和NanoTrans。

具体步骤（以12孔板中293T细胞转染为例，其他培养形式的转染参见下表）：

（1）转染前30-60分钟，每孔更换为0.75 mL含血清和抗生素的完全培养基。

（2）将2 ug DNA稀释在50 uL高葡萄糖无血清DMEM中，轻轻上下吹打或短暂涡旋混合。

（3）将3 uL NanoTrans试剂稀释在50 uL含有高葡萄糖的无血清DMEM中，轻轻上下吹打3-4次进行混合。

注意：切勿使用Opti-MEM稀释NanoTrans试剂和DNA。（Opti-MEM含有血清，会破坏转染复合物）

（4）立即将稀释的NanoTrans试剂一次性添加到稀释的DNA溶液中。

注意：不要以相反的顺序混合溶液！

（5）立即上下吸移3-4次或短暂涡旋混合。在室温下孵育10-15分钟，形成NanoTrans-DNA复合物。

注意：切勿将NanoTrans-DNA复合物保存超过20分钟。

（6）将 NanoTrans-DNA复合物滴加到每个孔中的培养基上，轻轻旋转平板使混合液均匀分布。

（7）转染后12-18小时，弃去含NanoTrans-DNA复合物的培养基，用新鲜完整的含血清/抗生素的培养基替换。对于敏感细胞，为了降低细胞毒性，在转染后5小时，移除NanoTrans-DNA复合物并用完全培养基替换。

（8）转染后24至48小时荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测转染效率

                                                                     不同培养形式使用量建议值

目的细胞转染预实验（以12孔板为例，DNA浓度范围为2 ug-3ug）：

（1）在转染前的30-60分钟， 更換培养基， 并在每孔中加入0.5 mL的完全培养基（含血清和抗生素）；

（2）将7.5 ug DNA加入到盛有187.5 ul高葡萄糖无血清DMEM中，轻轻上下吸移或短暂涡旋混合。

（3）将11.25 uL NanoTrans试剂稀释在187.5 uL含有高葡萄糖的无血清DMEM中，轻轻上下吸移3-4次进行混合。

（4）立即将稀释的NanoTrans溶液一次性添加到稀释的DNA溶液中。

注意：不要以相反的顺序混合溶液！

（5）立即上下吸移3-4次或短暂涡旋混合。在室温下孵育10-15分钟，形成NanoTrans-DNA复合物。

注意：切勿将NanoTrans-DNA复合物保存超过20分钟。

（6）取100 uL、125 uL、150 uL转染复合物分别加入加到每个孔中，轻轻旋转平板使混合液均匀分布。

（7）转染后12-18小时，移除含NanoTrans-DNA复合物的培养基，用新鲜完整的含血清/抗生素的培养基替换。对于敏感细胞，为了降低细胞毒性，在转染后5小时，移除NanoTrans-DNA复合物并用完全培养基替换。

（8）转染24-48小时后用荧光显微镜或流式细胞仪检测3种不同 DNA浓度下的转染效果选择出最佳的转染条件。

注意：该转染预实验仅供参考，具体操作请根据具体实验进行设定。