Nanotrans-慢病毒包装说明书.doc

产品简介：

NanoTrans ™ 转染试剂是佰欧晶最新研发的一种以纳米材料为基础的便捷高效细胞转染试剂，达到甚至超过了国际主流转染试剂的转染效果，适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以及用于基因治疗和mRNA疫苗载体。

保存条件：

4 ℃保存，一年有效。

注意事项：

• 为了您的安全与健康，操作时请穿戴实验服、手套；

• 操作时请在生物安全柜或洁净工作台进行操作；

• 转染前必须保证细胞状态良好和传代次数；

• 制备NanoTrans-DNA复合物时，请不要使用含有血清的溶液；

• 阳性对照组设置：每次转染设置GFP对照组；

• 废弃物请丢入专门的生物废弃物处理袋；

• 如不小心接触到皮肤或眼睛请用大量清水冲洗；

• 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

使用方法：

细胞转染一般步骤：

步骤一：细胞接种。细胞在转染前18至24小时将HEK-293T细胞均匀铺至10cm的细胞培养皿中，使单层细胞密度在转染时达到最佳（80%）。转染前30-60分钟，将含血清和抗生素的5ml完全培养基新鲜加入到培养皿中。

注意：高血清含量（> 5%）的抗生素通常对转染效率没有抑制作用，建议使用含完整血清/抗生素的培养基作为起点。

步骤二：NanoTrans-DNA复合物的制备和转染。为确保NanoTrans-DNA复合物颗粒具有最佳尺寸，建议使用高葡萄糖无血清DMEM稀释DNA 和NanoTrans。

• 具体步骤：

（1）转染前30-60分钟，10cm培养皿更换为5mL含血清和抗生素的完整培养基；

（2）准备两个EP管，分别加入500ul无血清DMEM培养基，其中一管中加入5ug目的质粒与5ug包装质粒，混匀；

（3）另一管中加入15ul NanoTrans转染试剂，混匀。

注意：切勿使用Opti-MEM稀释NanoTrans试剂和DNA。（Opti-MEM含有血清，会破坏转染复合物）

（4）立即将稀释的NanoTrans溶液一次性添加到稀释的DNA溶液中。

注意：不要以相反的顺序混合溶液！

（5）立即上下吹打3-4次或短暂涡旋混合。在室温下孵育10-15分钟，形成NanoTrans-DNA复合物。

注意：切勿将NanoTrans-DNA复合物保存超过20分钟。

（6）将 NanoTrans-DNA复合物滴加到培养皿中，轻轻旋转平板使混合液均匀分布。

（7）转染后4-6小时，弃去含NanoTrans-DNA复合物的培养基，用10ml新鲜完整的含血清/抗生素的培养基替换。

（8）分别于转染后48h和72h收集上清。